免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂（如用于制备免疫标记抗体等），也可供特异性免疫治疗用。

实验方法原理
       具有免疫原性的抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。由于抗原分子表面的不同决定簇为不同特异性的B细胞克隆所识别，因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体，实际上为针对该抗原分子表面不同决定簇的抗体混合物（即多克隆抗体）。另外，抗体的产生具有回忆应答的规律性，现为初次免疫注射与再次免疫注射后的抗体应答特点截然不同。这是由于记忆性B细胞参与再次应答所致。

实验材料       

       家兔 

       试剂、试剂盒
       灭菌生理盐水   IgG   酒精   碘酒   羊毛脂   石蜡油   BCG   FIA   FCA-IgG
       仪器、耗材:刀   镊子   注射器   针头   称量瓶   量筒   动物固定架   三角烧瓶   手术器械   血管夹   黑丝线   放血管
         
实验步骤
一、免疫方法 
      据抗原的性质不同而异。下面以制备家兔抗人IgG免疫血清为例作具体说明。
      1.  用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛，以酒精及碘酒消毒皮肤。

      2.  第一次免疫 用2 ml注射器吸取弗氏完全佐剂（FCA）乳化的抗原（人IgG）下称FCA IgG液1 ml，每侧脚掌皮下各注入0.5 ml。  

      4.  间隔7-10 天后，从耳静脉采血0.5～1.0 ml，分离血清，以双相琼脂扩散试验测定免疫血清的抗体效价（即试血）。效价至少应达到1∶16以上时才能放血。  

      5.  若效价未达到要求，可用不加佐剂的抗原液（人IgG）耳静脉内注射免疫。即于1 周内注射3 次，分别为0.1、0.3、0.5 ml。间隔1 周再试血。如效价达到要求应立即放血。另外，也可在第2 次免疫后，以弗氏不完全佐剂        （FIA）乳化的抗原（人IgG）（简称FIA-IgG）再免疫1-2 次。注射部位、剂量和间隔均同第2 次，再试血测抗体效价，如效价达到要求立即放血。

二、放血 
      1.  心脏采用血法
    （1）家兔仰面，四肢缚于动物固定架上（或由助手抓住四肢固定）。
   （2）剪去左胸部兔毛，消毒皮肤。
   （3）用左姆指摸到胸骨剑突处，食指及中指放在右胸处轻轻向左推心脏，并使心脏固定于左胸侧位置。然后，以左拇指触摸心脏搏动最强的部位。
   （4）用50 ml注射器（连接16号针头），倾针45°角度，对准心搏最强处刺入心脏抽血致死。
   （5）将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中，待凝固后分离血清。
     

     2.   颈动脉放血法
          （1）家兔仰卧同上固定。头部略放低以暴露颈部。剃毛及消毒皮肤。
   （2）沿颈部中线切开皮肤约10 cm，分离皮下组织，直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌。
   （3）分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织，暴露出颈总动脉后使之游离。
   （4）于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住。
   （5）用尖头小剪刀在两根丝线间的动脉璧上剪一小口，插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上，以防放血管滑脱。
   （6）松开血管夹，使血液流入灭菌三角烧瓶中。一般一只家兔可放血80～100 ml。

三、分离血清   
        将三角烧瓶的血置37 ℃温箱1 小时，再置4 ℃冰箱内3～4 小时。待血液凝固血块收缩后，用毛细滴管吸取血清。于3000 rpm离心15 分钟，取上清加入防腐剂（0.01 ％硫柳汞或0.02 ％叠氮钠，最终浓度），分装后置4 ℃冰箱中保存备用。 （本文转载丁香园）