Northern blot
发布人：admin
浏览次数：1343
发布时间：2017-10-12
关键是提RNA的步骤，一定要防止降解，且上样量也要足够大，做的时候最好是将样品研磨充分后将TRIZAL放入研钵中，待溶解后，在放入离心管中。
提取风干后用去离子甲酰胺溶解，其溶解度很大，一般每微升可以溶解1微克，且还可以防止RNA降解，效果很好呀！
(1) 凝胶的制备。
如准备100ml凝胶需要加入：琼脂糖1g；10×MOPS缓冲液10ml；经DEPC处理的水73 ml；加热溶化凝胶，混匀，凉至50℃时加入17ml 37%的甲醛，混匀，倒胶制板，甲醛有毒且易挥发，制备变性胶应在通风橱内操作，电泳时应盖严电泳槽；
(2) RNA样品的准备：总RNA通常需要50μg，溶于上样缓冲液中，在沸水浴中加热样品2min，冰上冷却样品；
(3) 凝胶电泳：以1×MOPS缓冲液作为电泳缓冲液，5～7.5V/cm跑胶2～3h，或者等到溴酚蓝迁移到胶的3/4处时停止电泳；
(4) 凝胶的处理：在DEPC水中浸泡胶15min，重复3次，缓冲液要足够使胶在容器内漂浮；
(5) 转膜、探针标记、杂交和检测均同Southern杂交部分。
（本文转载丁香通）
