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细胞两种划痕实验对比你知多少?

划痕实验——作为SCI论文必备的实验之一,常用方法有两种,接下来中洪小编就带你们来看看这两种方法哪种比较适合你!


实验原理:细胞划痕(修复)法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,观察周边细胞是否生长(修复)至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力。


实验通常需设定正常对照组和实验组,实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。


一、传统实验方法


实验步骤:


将所需的材料进行灭菌,包括直尺和marker笔


1、先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。


2、在孔中加入约5×105个细胞,具体数量因细胞种类不同而不同,接种原则为过夜后融合率达到100%。


3、第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。


4、PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。


5、放入37℃ 5% CO2培养箱,培养。可按0,6,12,24h时间点取样,拍照(具体时间依实验需要而定)。  


注意事项: 


1、在用PBS缓冲液冲洗时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴壁细胞,影响实验拍照结果。


2、一般做划痕实验,都是无血清或者低血清(<2%)否则细胞增殖就不能忽略。  


3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,作为固定的检测点,以解决了前后观察时位置不固定的问题。


二、Culture Insert方法


实验步骤:


准备材料:细胞,培养液,culture Insert,镊子。


1、准备细胞悬液:根据细胞类型将细胞悬液稀释至3-7×105个/ml,浓度控制在24小时内融合成单层。 

2、在培养插件的每个孔中加入70ul细胞悬液,放入培养箱中培养。

3、细胞贴壁后,使用灭菌的镊子移除培养插件。

4、加入无血清培养基培养。

5、每隔4-6小时拍照记录。

6、根据收集图片使用Wimasis分析实验结果。



三、实验对比



传统实验方法


Culture Insert方法

便捷程度


一般

非常便捷

成本


昂贵

划痕效果


划痕宽度不一

划痕宽度一致,可重复使用

损伤

对玻片表面包有一点损伤

可移除的插入元件,对玻片表面包被几乎没有损伤


好了,以上就是中洪小编做的这些对比了!总体来说Culture Insert实验方法更胜一筹,在经济允许的情况下,选择这种实验方法比较好哦。若实验经费不足,自己手画也是不错的选择。

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