D-Hanks液的配制
(1)Hanks和D-Hanks液的成分比较。
(2)依次加入药品至800mL蒸馏水中,溶解后定容至1000mL。分装成100mL/瓶,其中1瓶加入终浓度0.02%和DETA,准备配制胰蛋白酶。
(3)高压灭菌,10MPa,10min。
胰蛋白酶消化液的配制
(1)在D-Hanks液高压灭菌之后,晾至室温,4℃保存备用。
(2)称取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天时研磨器应放在冰浴中),加入少量D-Hanks液碾磨100~1000次,调制成糊状。再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中,4℃下磁力搅拌使完全溶解(一般4~12h)。
(3)用NaHCO3干粉将胰酶溶液的pH调至8.0左右(胰酶作用的最适pH为8.2)。
(4)过滤除菌(方法见前篇培养基的配制),—20℃保存。