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细胞的碘化丙啶染色用于FACS分析

     FACS用于研究细胞组分DNA,碘化丙啶(PI)嵌入核酸双链中并可以发荧光。它不能进入活细胞,但是可以进入正在或者已经死亡的细胞。因此PI可以用于免疫荧光染色来鉴定死细胞。DNA染色可以用于研究细胞周期。相对的DNA含量可以坚持G1G2S期细胞的比例。在DNA染色中凋亡的细胞有特有的颜色。


     一、材料和试剂


     1.  TritonX-100SigmaCatalogNo.T9284


     2.  碘化丙啶(SigmaCatalogNo.P-4170


     3.  乙醇


     4.  RNaseASigmaCatalogNo.R4642


     二、仪器


     1.  离心机


     2.  流式细胞仪器(FACS


     三、步骤


     1.  胰蛋白酶处理和收集细胞,将细胞固定到0.5 ml 70%EtOH(预冷到-20°C过夜)。


     2.  存储固定的细胞到冰上至少一个小时最多到几天。


     3.  离心细胞2 min4 000 rpm


     4.  在含有0.25%TritonX-1000.5 ml PBS溶液中重悬细胞,并且在冰上孵育15 min


     5.  离心细胞2 min4 000 rpm


     6.  弃掉上清液,并在含有10 μg/ml RNaseA20 μg/ml PI储存液的0.5 ml PBS重悬细胞,转移到FACS管子中在黑暗中室温孵育30分钟。


     7.  准备做FACS

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