细胞凋亡的检测方法主要包括以下几种：细胞径HE、吖啶橙（AO)、Hoechst33342、Hoechst33258染色，利用光境或荧光显微镜对细胞形态学特征进行观测。其中Hoechst33342/PI双标记法是检测细胞凋亡的常规方法。PI是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，由于坏死细胞的膜透性发生改变，则能被PI染色。Hoechst33342是能能够与DNA特异结合的具有良好膜通透性的荧光染料，正常细胞、坏死细胞及凋亡细胞的DNA均可被Hoechst33342染色，当细胞经Hoechst33342/PI双染色后，坏死细胞呈PI强阳性染色（红色），而凋亡细胞或正常细胞呈PI低染，利用荧光显微镜技术结合凋亡细胞核形态的变化就可以将坏死细胞、凋亡细胞和正常细胞区分开来。‚利用DNA凝胶电泳及DNA片段原位标记法（TURNEL assay）检测凋亡细胞DNA的断裂。ƒ利用流式细胞仪检测亚G₁期细胞的比例或利用Annexin V、PI联合标记法检测细胞膜磷脂酰丝氨酸翻转，正常活细胞Annexin V、PI均低染；凋亡细胞Annexin V高染、PI低染；坏死细胞PI高染。

【实验方法与步骤】

  （1）细胞凋亡的诱导：HeLa细胞常规传代培养至对数生长期(见细胞传代培养）。实验组细胞加入顺铂溶液（生理盐水配置）至终浓度为20μmo1/L,37℃，5% CO₂条件下继续培养。空白实验对照加入等体积的生理盐水，同样条件继续培养。24h后进行染色及形态学观察。

  （2）胰酶消化细胞，将培养基上清及消化下来的细胞一同转入离心管中600~800r/min离心10min。

  （3）吸去上清，用1mL PBS重悬细胞沉淀，并转入1.5mL微量离心管中，600~800r/min离心10min。

  （4）吸去上清，用500μL PBS重量细胞沉淀，取178μL转入0.5mL的微量离心管中，加入PI 20μL（终浓度100μg/mL），Hoechest 33342 2μL（终浓度10μg/mL），混匀，37℃温箱中避光标记15min。

  （5）600~800r/min离心10min，弃上清，加50μL PBS重悬细胞。

  （6）分别从实验组及对照组中取10μL细胞悬液滴于载玻片上，盖上盖玻片。

  （7）荧光显微镜20倍物镜在紫外光激发下观察，可观察到凋亡细胞核形态发生明显的改变，出现染色质凝集及边缘化。

【注意事项】

  （1）诱导细胞凋亡后收集细胞时，注意要同时收集细胞培养基上清液。

  （2）悬浮细胞时动作要轻柔，避免损伤细胞。

  （3）在实验中可同时设计坏死细胞的对照，例如，取正常细胞经低渗后进行染色观察。