新浪微博
微信互动

大讨论:利用现有技术,如何鉴定一个全新的病毒呢?

     



      80年代的技术很经典,但那时分子生物学不够发达,现在方法有无进步呢?如何利用现在的技术来鉴定全新的病毒呢?有此想法很久了,可一直未搞清楚。这也跟如何发现一个新基因的道理是相通的。这是真正创新的基础。


网友alishang:我先来最简单的:      

      1、采集各种病料,用各种细胞、宿主盲传,分离病毒,期望看到细胞病变。如果连细胞病变都没有,没折了?有别的办法证明有病毒吗?。      

      2、纯化病毒,做电镜观察,与已有病毒形态、大小相似好办,要是完全不一样呢???如尼帕病毒和SARS,电镜看的出来。大家有看到发现新病毒的文献报道吗?      

      3、可否直接抽病料中的基因组,来个大海捞针?不过怎么从中鉴定呢?      

      4、电镜看不出形态、大小,纯化病毒跑二维电泳挖蛋白点测序行不?好象可行哦。      我先想这么多,大家继续啊……


网友mark7447:这是一个很好的题目,不过应该有很多人在考虑,我谈谈我的想法。     

      1、能不能找一种对所有病毒都敏感的细胞,当有新的病毒出现时,可以直接培养,无论有无CPE,先拿到病毒就可以进行下一步的工作了。      

      2、可不可以用随机引物对生物标本进行扩增,测序后比对序列,定出是否是新的病原。      

      3、急性期及恢复期的血液标本特别重要,一定要尽量收集多份总量的血清,进行中和实验等等。      

      4、应该遵循郭霍法则,进行相关的动物实验研究。


网友alishang:经询问,你的第二点在测序公司是能实现的,第一点几乎是不可能完成的任务。


网友docxat:想知道如何鉴定,建议看看SARS的文献吧,好多哦。


网友黑山大王:我是这样做的:      

      1、纯化病毒粒子,在电镜下观察其形态,如果病毒量大,可以制多抗 ,看看和已知的病毒有没有免疫交叉反应。      

      2、蛋白N端测序---序列比较----PCR引物设计---PCR---测序---核酸序列比较。       Sars的鉴定,相对大家可能是最浅显的例子,经电镜一看,心中就能有所判定(冠状),能抓住方向。如果是一个全新的病毒,在形态上不能归类,只知道大小,如何往下做呢?


网友alishang说:鉴定一个全新的病毒,我想,要证明以下方面:      

      1、不是已有的病毒;      

      2、是新的      

      3、有什么特性      

      4、下结论,是什么病毒      根据80年代的文献,这些是能实现的。关键是如何利用现有的技术?现有技术在解决这个问题上有无进步??


网友nylli的观点是:如前面的人所述,临床经验是相当重要的,还有组织病理知识等等一些基础也是必不可少的。关键是做出判断是否为新的病毒。


RISC网友的观点是:      

      1、目前分离鉴定一种新型病毒确实很难,不只有技术上的限制,还有学术权威等潜在的影响。      

      2、重视临床信息(体征、临床标本及辅助检查结果以及预后等等)与实验室工作的结合。有效的临床信息可以帮助缩小范围,为实验室工作的研究方案提供指导。      

      3、传统的病毒盲传分离培养方法还是非常有效的,不能小看。目前还是作为一个金标准。      

      4、借助分子生物学手段从核酸入手,比如可以根据目前已知的各个种属的病毒的保守区PCR引物,建立一个通用PCR引物库,将来有了高通量的技术平台时可以借助引物库进行快速鉴定。当然这也只是一个设想。      

      5、蛋白水平的研究,比如2D电泳等将来达到一个比较成熟的技术平台,可以有效的进行病毒与宿主蛋白差异表达的研究,作为研究新型病毒的信息。      一点拙见,请大家批评指正。


kinky网友的观点是:据说通过纯化病毒,做电镜观察其形态几乎是不可能的。因为病毒颗粒太小,要找到一个合适的视野特别难,所以这个方法是书本上说起来容易,实际操作起来难度很大。


freecell网友说:我的意见和RISC的差不多。新病毒的鉴定是个贯穿多学科的过程。      

      第一:是重视临床鉴别诊断。例如2003年的SARS发现,就是通过与常见呼吸道病毒或其它病原微生物的症状进行鉴别,从而得到部分线索;      

      第二:是血清学检验方法的运用。利用抗原捕捉ELISA,筛选和排除可疑病原体;采用双份血清IgG、IgM进行检测,分析抗体产生规律,摸清感染进程;      

      第三:是经典病毒学方法的运用。接种细胞,产生CPE。但是HCV的细胞模型直到去年才建立起来。一般认为,在电镜下观察到病毒颗粒,是病毒鉴定的金标准;      

      第四:是运用分子生物学方法,分别进行扩增,排除可疑病原体。在得到序列的情况下,进行BLAST,得到病毒的大致分类位置;      

      第五:当然是功能基因组学和蛋白质组学方法了,例如基因芯片、2D等。有趣的是,轮状病毒不同型的鉴别,是通过SDS-PAGE实现的,而且至今尚在应用;      值得一提的是,上述方法并非截然分开的,需要进行综合运用。鉴定一个全新的病毒,需要扎实的理论、丰富的经验、睿智的实验设计、大胆的推测演绎。


天行者007网友说:我们是按照以下步骤进行的(我们是做水产病毒鉴定与检测的)       

      1、采集病料,分离细菌的有无,如没有细菌,进行电镜观察,根据病毒的形态初步鉴定      

      2、利用可能敏感的细胞、分离病毒,观察细胞病变,电镜观察。      

      3、利用宿主(鱼类)进行病毒的回归感染试验,观察病鱼的病症,同时进行电镜观察。      

      4、纯化病毒,做电镜观察。      

      5、直接抽病毒的基因组(分清是DNA还是RNA病毒),根据目前已知的各个种属的病毒的保守区PCR引物进行初步的PCR。      

      6、进行病毒的基因组的酶切分析,同时采用AFLP分析(DNA病毒),切胶测核酸序列,进行Blast 比对(我们的结果就出来了)      

      7、纯化病毒后进行一维、二维电泳挖蛋白点测序,应该可行,但是我们没有做


tgzhaoyujun网友的观点是:个人认为要确定是否是新的病毒,在出现病变或相应的生理反应或影响理论上应该出现的结果时,并且病原是滤过性的,可以怀疑是新病毒,不能纯化出病毒或在电镜下看到或出现CPE,不能否认病毒的存在。涓涓细流而成江河,遇到的人多了,总会出现转机的。


whw3791网友说:这是一个很有意思的话题,病毒首先得能通过滤膜,一般情况下最好有宿主的细胞株,有的病毒如马立克病毒是细胞毒,脱离细胞就不能生存,而有的病毒是很活泼的!病毒的确定要有丰富的临床经验!


oheart_ren网友的观点是:做病毒的,以下是我们的经典途径:tissue culture(CPE)-----EM observe(电镜)------serology test------histology,pathological character----molecular detection-----animal experiment


xiangtian2004网友的观点是:有的时候病毒未必能够培养成功,所以基因组应该是必须的。现在的微生物基因组学可以提供很多的有用的相关的信息,比如分析比对寻找相近的谱系。现在的病毒的基因文库也应该逐渐的完善丰富的,看过闻玉梅老师2001年的有关微生物基因组学国际大会的相关的许多述评,主要讲的微生物是细菌。最近几年的有关国际微生物基因组学的大会的文章还没有见到,没有来得及去搜索,不知目前的进展如何?


      (本文转载:丁香通)

上一篇:侵袭性曲霉菌病--ICU患者的高危因素
下一篇:双歧杆菌的分离、培养及鉴定
分享到: