信号通路研究 我公司的人类基因ORF克隆按照不同的信号传导、代谢、疾病通路和相关性、基因家族等进行了分类。将已知同一通路的shRNA克隆以96孔或384孔板的形式排列在一起,可一次研究一组基因在某一信号通路中的功能。目前我公司已可提供针对人类全部激酶基因的shRNA克隆,并已按照按不同激酶的功能进行了分类。
ORF表达克隆确证 我公司已有shRNA相应人类靶基因的ORF克隆,可装在各种表达载体中,带有不同的标签和跟踪标记基因。这些正常的ORF表达克隆和在shRNA靶序列带有沉默突变的同样的ORF表达克隆,可以用于shRNA确认研究和基因功能拯救研究。
2.Western blot检测 检测表达抑制效应,大部分都需要用Western Blot方法来检测所表达蛋白表达水平的下调。我公司提供2500多种单克隆抗体和针对人类蛋白的多克隆抗体。
3.功能检测 检测表达抑制效应,还可通过生物和生化的终点分析方法,分析细胞增殖、克隆形成、细胞周期、细胞迁移等,根据目的基因具体的功能而定。
4.跟踪标记基因或蛋白进行功能检测 当所研究基因的内源转录水平很低,并且/或者q-RT-PCR和WB检测不适宜的时候, 表达抑制效应也可通过共转导shRNA克隆和一个含目的基因并带了跟踪标记基因的表达克隆,跟踪标记基因所编码的报告蛋白可用于功能检测。靶基因的mRNA遭shRNA的破坏,就同时导致了跟踪标记基因的mRNA遭破坏,从而表现为报告蛋白的表达下降。这样,表达抑制效应就可以用报告蛋白的酶活性分析结果来进行量化。