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肝组织的VEGF免疫组化方法

方法一:


       1、  白片(石蜡切片)放于处理好的载玻片上,烤片60度1h(此载玻片未经粘片剂处理)


       2、  二甲苯5min *3


       3、  异丙醇5min *3


       4、  乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min


       5、  双蒸水洗3min*3


       6、  丙酮洗3 次


       7、  APES胶立式染缸1-3min


        8、  丙酮洗


  9、  双蒸水冲3次


  10、  PBS洗5min


  11、  3%双氧水10-15min


        12、  PBS洗5min


        13、  抗原修复(微波加热法)


       14、  PBS冲5min*3次


       15、  非免疫性动物血清50ul封闭


       16、  甩去血清,加入50ul一抗,室温下60min


       17、  PBS冲洗5min*3次


       18、  加入50ul二抗,室温下20min


       19、  PBS冲5min*3次


       20、  ABC复合物50ul,室温下20-30min


       21、  PBS冲5min*3次


       22、  DAB显色液3-10min


       23、  双蒸水洗1min*2次


       24、  苏木素复染0.5-1min


       25、  自来水洗30min


       26、  封片

方法二:


       1、  白片放于处理好的载玻片上,烤片60度5d (此载玻片经粘片剂APES处理)


       2、  二甲苯5min *3


       3、  异丙醇5min *3


       4、  乙醇96%、90%、80%、70%、50%各3min


       5、  双蒸水洗3min*3


       6、  双氧水10-15min


       7、  PBS洗5min


 8、  抗原修复(微波加热法)


       9、  PBS冲5min*3次


       10、  非免疫性动物血清50ul封闭


       11、  甩去血清,加入50ul一抗,室温下60mi


 12、  PBS冲洗5min*3次


 13、  加入50ul二抗,室温下20min


       14、  PBS冲5min*3次


       15、  ABC复合物50ul,室温下20-30min


       16、  PBS冲5min*3次


       17、  DAB显色液3-10min


       18、  双蒸水洗1min*2次


       19、  苏木素复染0.5-1min


       20、  自来水洗30min


       21、  封片

抗原修复用微波加热法:


       1、0.01M柠檬酸—柠檬酸盐缓冲液放入微波炉内加热至沸腾


 2、脱蜡水化后组织置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,再中档继续处理15min


       3、取出波炉盒,室温放置20min


       4、取出切片架,用PBS冲洗3次,后滴加50ul非免疫性动物血清

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