3' UTR序列来源于基因序列的公共数据库并插入到各自载体系统的firefly或Gaussia荧光素酶报告基因下游。克隆采用SV40启动子,在哺乳动物细胞中转录生成包含有firefly或 Gaussia荧光素酶和3' UTR靶标序列的嵌合mRNA。因此,可通过对firefly 或 Gaussia荧光素酶的功能分析来研究mRNA-miRNA靶标的相互作用。
2.简单的系统设计
3' UTR靶标序列插入在firefly或Gaussia荧光素酶下游,当miRNA复合体与3' UTR靶标特异结合时,荧光素酶的表达受到抑制。
3.方便的双报告载体
载体中的两个报告基因,一个可用于检测调节作用,另一个可用作内参和信号校对。
4.可使用配套的试剂盒进行简单定量
可使用配套的试剂盒对细胞裂解物(firefly荧光素酶,非分泌型)或细胞上清(Gaussia荧光素酶,分泌型)中的荧光素酶活性进行简单定量。
5.活细胞分析(pEZX-MT05 vector)
分泌型Gaussia荧光素酶,无需细胞裂解。
6.节省时间和样本,减少突变,简化试验流程。