目的    建立微滴式数字 PCR 技术作为关键指标,实现精准检测艾滋病动物模型中细胞及组织中 SIV DNA 载量,用于储存库隐匿病毒实时动态评估。

　　方法    根据成熟的 qPCR 方法,对 微滴式 dPCR 的反应条件进行了优化,确定最适退火温度;通过对 10 倍系列稀释 pGEM-SIVgag477 质粒标准品的检 测,确定 ddPCR 检测范围。 并通过对若干 DNA 样品的多次检测,判断该检测方法的稳定性。

　　结果    ddPCR 的退火 温度为 60℃ ;检测范围是 0. 3~ 3. 96×104 copies/ μL;微滴式 dPCR 与 qPCR 有良好的相关性,相关系数 r = 0. 9981。

　　结论    本研究建立了基于微滴式 dPCR 的 SIV 病毒 DNA 的绝对定量方法,可有效的对细胞和组织中病毒储存库样 本中病毒 DNA 载量进行动态绝对定量,极大提高了模型应用评价的准确度。