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mRNA原位杂交技术三


实验步骤:
二.杂交与显色
1、将加入探针的杂交液先于50℃预热,均匀涂于切片表面,加上硅化盖玻片,放于湿盒中,50℃孵育12-16h。
2、1×SSC(含50%甲酰胺),50℃洗涤2次,每次10min。
3、2×SSC(含50%甲酰胺),37℃洗涤10min。
4、2×SSC(0.5ug/ml RNaseA),37℃洗涤30min。
5、1×SSC,50℃洗涤10min。
6、1×PBS(含0.1%Tween20),50℃洗涤2次,每次10min。
7、PBT室温洗涤10min。
8、封闭液处理1-1.5h。
9、加抗体(用封闭剂按1:500比例稀释),均匀地涂于切片表面,放于湿盒中,室温1-2h后4℃过夜(抗体1:500稀释于1×封闭液)。
10、PBT洗涤3次,每次15min。
11、显色缓冲液洗5min。
12、滴加显色液,黑暗中显色至适度。可在显微镜下多次观察。
13、显色终止液洗10min,双蒸水洗5次。
14、甲基绿(0.25%)滴加染色几秒中,双真水洗5min。
15、脱水封片。

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