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体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验

实验方法原理

      抗药性细胞模型的筛选大多采取长时间药物处理、诱导抗性,最总筛选出具有一定抗性的细胞克隆。

      实验材料 小鼠
      试剂、试剂盒 小牛血清DMEMDOX
      仪器、耗材 CO2培养箱无菌钢圈
实验步骤 
一、培养条件
       用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO2,37℃培养。
二、实验步骤
       1.  将CHO细胞培养在含10%血清的DMEM培养液中,先用DOX(阿霉素)0.01 ug/ml 诱导培养CHO细胞3个月。
       2.  然后在3个月内逐步增倍DOX的浓度达0.1 ul/ml,接着进行DOX低浓度的筛选。
       3.  随后用无菌钢圈套取抗性倍数较高的克隆RC1作CHO和RC1对DOX的剂量-反应曲线,求CHO和RC1的IC50值。
       4.  抗性倍数即为RC1的IC50与CHO的IC50。
注意事项 
       1.   要具备培养细胞的实验室条件,谨防污染。
       2.  通过实验计算出敏感细胞对该药物的IC50值,以确定其实诱导浓度。
       3.  采用长期增量的培养法可产生稳定的抗药性细胞株,对阿霉素等产生抗性的细胞株,往往对其他天然来源的抗肿瘤药亦可产生抗药性。(转帖)


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