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制备动物模型的基因修饰技术之不同基因修饰技术存在特殊现象和原因对照表


技术类型 技术原理 随机插入现象 脱靶现象 马赛克现象
传统ES打靶技术 大片段的同源重组 可以排除所有的随机插入,所有随机插入的克隆都可以被Southern Blot检测到并排除 无脱靶风险
因为同源重组技术是一个极度保守的技术,只有几个碱基的差异就同源重组发生的概率就会大大下降

动物由单一克隆发育而成,修饰的基因型一致
TALEN技术 KO:核酸酶定点切割
KI:核酸酶定点切割后产生DNA断口,相对提高该位点的短片段同源重组效率
无法排除风险
特别是在做KI的应用时候,线性化的DNA会产生较高概率的随机插入
无法排除风险
TALEN识别序列较短,获得的动物必须进行脱靶效应的检测
存在
如果核酸酶起作用不是在胚胎的单细胞阶段,就会出现一个动物有多种修饰基因型的现象
CRISPR/Cas9技术 KO :核酸酶定点切割
KI:核酸酶定点切割后产生DNA断口,相对提高该位点的短片段同源重组效率
无法排除风险
特别是在做KI的应用时候,线性化的DNA会产生较高概率的随机插入
无法排除风险
gRNA识别序列较短,获得的动物必须进行脱靶效应的检测
存在
如果核酸酶起作用不是在胚胎的单细胞阶段,就会出现一个动物有多种修饰基因型的现象
TetraOneTM 技术 大片段的同源重组 可以排除所有的随机插入,所有随机插入的克隆都可以被Southern Blot检测到并排除 无脱靶风险
因为同源重组技术是一个极度保守的技术,只有几个碱基的差异就同源重组发生的概率就会大大下降

动物由单一克隆发育而成,基因型一致
 


      (本文内转载丁香通
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