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脂肪氧化酶活性测定

     植物材料,从叶片中提取粗蛋白,0.5g叶片使用液氮研磨,加入到4ml冰预冷提取缓冲液(0.05mol/L PH6.4 磷酸钠缓冲液,1mmol/L EDTA,1%PVP,1mmol/LDTT)中,12,000g,4℃离心10min,取上清进行脂肪氧化酶酶活性分析。

 

     通过检测234nm光吸收(Beckman DU800, Beckman)来测定脂肪氧化酶活性,底物溶液配制:280mg亚油酸,280mgTween-20加入到8mL双蒸水中,上下颠倒混匀,加入1mL 1mol/L NaOH使溶液澄清加双蒸水定容到50mL,-70℃保存备用(Huang, et al. 2005)。2mL反应体系包括:1.93mL 0.1mol/L pH6.4 磷酸钠缓冲液,50μL底物溶液,20μL酶粗提液,同时设立不加酶的空白对照,25℃反应3min,记录234nm光吸收变化。

 

 

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