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细胞慢病毒感染


       慢病毒源于反转录病毒,但又有所不同。在感染能力方面比反转录病毒还强,可有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、干细胞等多中类型的细胞,又很少引发基因的免疫反应。


实验方法:

       在大规模的感染之前,优化以下参数:细胞种植密度,慢病毒的数量,嘌呤霉素的浓度,感染时间,以确定一个实验的最适条件。在6cm培养皿中种植适当密度的XXX细胞,每孔体积6mL。贴壁细胞:转染前1天种植XXX细胞。悬浮细胞:转染当天种植XXX细胞,培养基中需要含有凝聚胺。XXX细胞中加入病毒:贴壁细胞,弃掉培养基,加入新鲜的含有凝聚胺的培养基。或者,弃掉部分培养基并且补充含有凝聚胺的培养基。调整体积和凝聚胺的浓度,使得凝聚胺的终浓度为8μg/mL。病毒感染:孵育细胞过夜。感染后24h更换培养基。弃掉培养基,换入6mL新鲜的培养基。如果需要抗生素选择,则使用含有抗生素的新鲜培养基。注意:嘌呤霉素的浓度根据每种细胞系来进行优化;常用的浓度范围为2-5μg/mL。孵育细胞,根据需要每隔几天更换培养基(如果需要,则要含有抗生素)。孵育时间的长短主要依赖于感染后的试验。

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