首先是逆转录酶和cDNA第一链的合成。逆转录酶是DNA或者RNA依赖的DNA聚合酶,可以利用DNA或者RNA合成DNA。cDNA的克隆主要是通过寡聚胸腺嘧啶从3’A尾巴开始合成cDNA,但这样得到的cDNA克隆中有10%~15%没有3’端的序列;6到9个核苷酸随机引物也可用于逆转录的反应中,这对于长转录本5’端的扩增很有利,但是这样的方法不能得到全长cDNA;其次是合成cDNA第二链。单链cDNA3’端的发卡结构,便于DNA聚合酶I发挥5’→3’聚合酶活性,合成cDNA的第二链;最后将双链cDNA克隆到质粒和噬菌体载体中进行扩增,最后进行测序,研究转录本的信息以及功能。
2.保证ORF区序列的准确性
3.所有cDNA克隆的基因全为NCBI标准
4.克隆易于在大肠杆菌保存和扩增基因
5.价格优惠,即购即得