苏木精-伊红染色法(hematoxylin- eosin staining),简称HE染色法,是石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。苏木精是一种天然染料,它本身并不能染色,在经氧化后变成苏木红才是真正的染料,苏木精对细胞核的亲和力并不强,而在媒染剂的帮助下才能较好的显示细胞核,此时细胞核呈红色,只有在碱性环境中,苏木红才变成蓝色。伊红Y是人工全盛染料,它可能是通过渗透或弥散作用完成染色的,因此和组织万分结合是不牢固的。它对细胞质着色。一般的组织变化和组织产物都可以通过这一染色法显示出来。是形态学最常用的染色方法。直到目前为止,病理组织学的基本知识,绝大多数都是从观察HE染色标本中得来,在质量较佳的HE染色切片上,各种组织或细胞的一般形态结特点都可以观察到。

    对手术室切除的全部或部分器官或大块组织切除标本;各种纤维内窥镜取材的小块组织标本:各种穿刺取材的穿刺小标本,各种细胞学标本,一些特殊检查的体液或血液标本,在取材时要做到准确、迅速、完整和具有代表性,从而保证组织病理的制片质量。病理科选材制片时根据不同组织用不同固定、脱水时间,不同的制片染色方法,例如:各种穿刺取材的小标本固定、脱水时间应缩短,脂肪组织固定脱水时间应延长。硬组织用新切片刀制片。软、破碎组织和活检组织已使用过旧切片刀制片。

    HE染色时根据不同组织选不同染色、脱水、脱腊时间。HE染色操作程序如下:1)二甲苯去蜡(经2次)5～ 10 min。2)无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各1～ 2 min,然后蒸馏水洗3 min(换数次)。3)苏木紫液染色约3～ 5 min(视染液种类和着色情况增减)。4)水洗;1%酸性乙醇(盐酸1 mI,70%乙醇99 ml),或1%盐酸分化。显微镜下控制。5)流水浸洗至少15 min,至细胞核呈蓝色。也可短时水洗后,浸于40℃温水使核变蓝。显微镜观察,若核染色过深或不足,应再分化或重染。6)伊红液染0.5～ 1 min后,95%乙醇2次,无水乙醇2次,每次约1～ 2 min。7)苯酚二甲苯(1∶ 3)5 min。8)二甲苯2次,每次3～ 5 min。9)用中性树胶或DPX以盖片封片,贴标签。

    染色各步骤所需的时间,常受温度、切片厚度等影响,可根据镜下观察所见酌情予以调整。各种染料试剂一般选用化学纯。各种染料着色效果常因生产厂和批号不同而异,启用任何新品,均应先试染。配成的染液、试液应盛于有色试剂瓶内,瓶签应写明名称、含量、配制年月日,顺序保存于避光橱中,必要者放冰箱内。凡须临用时配制者,配量应适当。但对组织化学反应(尤其是酶),其时间、温度等因素务必恒定,且应做对照片。染液着色力显著减退时应更新,染色反应不正常,应检查染液及试剂是否失效或误用。染色过程中,勿使切片干燥,以免影响细胞形态。染色完毕后用显微镜检查染色结果,是否符合要求,并核对标本种类、号码、数量是否无误,以保证制片的质量,为临床病理诊断垫定坚实基础。

    组织细胞取材、固定、脱水、切片的质量对HE染色影响很大,组织染色的质量直接影响到临床诊断,同时也影响临床治疗。所以对各种不同的标本取材要求不一样,包括取材的范围、取材方法,取材用的工具或者同样的工具要求采用不同的使用方法来切取标本。以防挤压组织,引起组织结构的变形。钳取困难时可采取针吸,实质性脏器肿物直径大于2 cm者均可针吸。例如,肺癌表面常覆盖有一层较厚的凝固性坏死或脂性分泌物,为提高标本的阳性率,可采用针吸方法,深部取样,体液量多要取其离心后的沉渣。骨组织要进行脱钙,否则造成制片困难,破坏细胞结构,HE染色得不到良好的效果,影响临床病理诊断。

    凡是需要送检的各种组织,除了有特殊要求外,都要首先固定。固定的目的在于尽量使组织和细胞保持与活体时相似的成份和形态,防止组织自溶和细菌性腐败的发生使原有构造消失影响诊断。不能固定又不能及时送检处理的标本要尽快放在低温或超低温条件下保存,固定标本所选固定剂及容器应据标本类型和检查项目而定。通常用10%福尔马林或95%酒精固定,这是最常用的固定液。但仍应及时送检,防止组织固定时间过长变脆、变硬影响制片的效果,因此而影响诊断,给病带来治疗上的困难。固定组织时,固定液要足量,一般至少应为组织块总体积的5～ 10倍以上,而且应在组织取下后立即或尽快放入适当的固定液中。大多数组织的固定时间为3～ 24 h,然后保存于70%酒精中,可在室温25℃固定,如低温(如4℃)固定时,固定时间应相应延长。最常用的固定方法为浸泡固定法。

    HE染色要注意各种试剂的浓度和量及环境温度和湿度,确保制片的质量,组织染色的质量直接影响到临床诊断,同时也影响临床治疗,在日常工作中病理技术人员要严格遵守各项操作规程,保证临床资料的准确性,保证病理诊断的准确性。通过对不同的组织病理采用不同的固定、脱水、制片、HE染色方法,使甲级制片率上升到96%以上,乙级片和丙级片下降20%,杜绝丁级片,大大的提高了HE染色质量及制片的质量,提高了病理诊断准确率,也提高了临床治愈率,为临床提供准确的病理资料。由此也认识到病理技术HE染色是病理诊断、临床诊断、临床治疗中不可确少的一个重要组成部分,通过它可以做出正确的病理诊断和发现寻求别的辅助方法,以达到准确完整的病理诊断。

    目前，病理诊断室现代医学界中的一种最为具有权威性的临床病理诊断方法，其诊断结果的准确性，不仅仅只取决于病理医生的技术水平，而且还与组织病理片的处理和染色效果密切相关。随着人们法律意识和自我保护意识的不断提升，病理诊断的风险也有逐年上升的趋势，在现实社会中，病理技术由于种种原因往往得不到足够的重视，为了提高临床病理诊断的准确性，一方面病理医生必须加强检测的责任心，提高诊断水平，另一方面更应该提供优质的组织病理切片，以保证诊断的准确性。病理工作目前普遍存在标本固定时间欠缺、组织脱水进行的不彻底、试剂使用过程中浓度变化，影响了切片的质量，无法提高病理的诊断正确率。

    病理科室在选择材料进行病理切片制作中，应该据不同组织采用不同的固定、脱水时间、不同的制片染色方式。手术室中切除的全部或者部分器官或者采用大块的组织切除标本，各种各样细胞学的标本，特出检查的体液或者血液标本，病理科室医生取材过程中要做到准确、迅速、完整以及具有代表性。HE 染色操作的流程主要包括：细胞涂片均潮干后固定在浓度为 95% 的乙醇中浸泡 15 min，显微镜观察后，
在之前固定的切片中选定进行免疫染色的区域，在区域的背面载玻片中用签字笔进行标记，标记号需要进行染色的抗体。后将细胞涂片按照顺序经过二甲苯、梯度的乙醇溶液和水，将涂片上的盖玻片及树胶洗脱完全；后加入 0.5% 盐酸 - 乙醇中将苏木红的颜色进行清洗，后采用水进行冲洗，加入稀释后的氨水将伊红的颜色脱掉；将载玻片单独拿出后浸泡于水中，多次进行洗涤，采用树胶或者 DPX 以盖片封片，帖标签；根据镜下观察到的细胞形式进行适当的调整，染色各个步骤所需要的时间，会受到温度、切片厚度等的影响；各种染料试剂一般均以化学纯为主。染色完毕后采用显微镜检查染色的结果，核对标本的种类、号码以及数量，保证切片的质量。

   病理科室对于组织细胞的取材、脱水、切片的质量对于 HE 染色的结果具有较大的影响，组织切片染色的质量直接影响着病理切片的诊断结果，对于诊断不明确的结果也会延伸到临床中对疾病的治疗，因此，不同的标本要有不同的取材方式，包括了取材标本的范围，对于标本的取材方法。HE 染色过程中关系染色成败的最关键的因素取决于对细胞核的着色，由物理及化学共同的作用进行这项工作，一方面主要是因为组织内部有许多微小的细孔，染料渗透后与组织进行牢固的结合，组织吸收染料后逐渐扩散、溶解，进而牢牢的固定；另一方面在于组织细胞内部含有酸性及碱性的物质，含有的酸性物质可以与染液中的部分阳离子进行结合，生成固定的分子，含有碱性物质的与染液中的阴离子结合，共同起到牢固性的作用。 

    固定的主要目的在于使组织及细胞保持与活体时相似的成分以及形态，防止制片过程中组织的自溶，组织原有的构造消失或者被破坏而影响了诊断的结果。固定后应该及时的送检，防止组织固定时间过长后导致变脆、变硬而影响了切片的效果，影响诊断结果，导致错误的治疗。HE 染色过程中应该注意采用的试剂的浓度变化，控制适当的温度及湿度，保证切片的质量，提高诊断结果的准确率。通过不断提高的HE染色技术，采用不同的固定、脱水、切片，提高了切片的质量，显著性的提高了病理诊断的准确率，由于结果的准确，也大大提高了临床上对针对性疾病的治愈率，为临床上提供了准确率更高的病理资料。因此，HE 染色技术是病理诊断、临床治疗过程中不可或缺的重要检测手段，通过诊断结果的准确性，为临床的治疗提供参考依据，具有明显的临床价值。